實時熒光定量PCR（Quantitative Real-time PCR）也稱 QPCR，是指在DNA 擴增反應中，以熒光化學物質(zhì)測單次聚合酶鏈式反應（PCR）循環(huán)后產(chǎn)物總量的方法。
實時熒光定量PCR儀主要由樣品載臺、基因擴增熱循環(huán)組件、微量熒光檢測光學系統(tǒng)、微電路控制系統(tǒng)、計算機及應用軟件組成。其中基因擴增熱循環(huán)組件工作原理與傳統(tǒng)基因擴增儀大致相同，不同廠家不同型號的產(chǎn)品分別采用空氣加熱、壓縮機制冷、半導體加熱制冷等工作方式。微量熒光檢測系統(tǒng)由熒光激發(fā)光學部件、微量熒光檢測部件、光路、控制系統(tǒng)組成。
常用的熒光激發(fā)方式有兩種：鹵鎢燈和LED；熒光檢測元件常用兩種方式：光電倍增管和冷光CCD攝像機，光單色元件有濾光片和光柵。在實時PCR擴增過程中，熒光信號被收集，轉(zhuǎn)化為成為擴增和熔解曲線。具體數(shù)據(jù)就是基線，熒光閾值和Ct值。
CT值: qPCR擴增過程中，擴增產(chǎn)物的熒光信號達到設定的熒光閾值時的所對應的擴增循環(huán)數(shù)(Cycle Threshold)。
基線:擴增曲線的水平部分(背景信號過高，可獨立設置)
在PCR早期，擴增處于理想情況下，循環(huán)數(shù)較少，產(chǎn)物積累少，產(chǎn)生熒光的水平不能與熒光本底背景明顯地區(qū)別，之后熒光的產(chǎn)生增加進入指數(shù)期。
可以在PCR反應剛處于指數(shù)期的某一點上來檢測PCR產(chǎn)物的量，以此作為“一定產(chǎn)物量”，并且由此來推斷模板最初的含量。一定產(chǎn)物量對應的熒光信號強度，也就是熒光閾值。
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